详细介绍
在分子生物学与基因工程研究中,琼脂糖凝胶电泳是DNA与RNA片段分离、鉴定及纯化最基础、最常用的技术手段。而电泳结果的清晰度与可靠性,在很大程度上取决于电泳缓冲液的品质。50×TAE电泳缓冲液(Tris-Acetate-EDTA Buffer) 正是为此而设计的经典核酸电泳专用缓冲液。它由Tris(三羟甲基氨基甲烷)、乙酸(Acetic Acid)及EDTA(乙二胺四乙酸) 按优化配比精确配制而成,缓冲能力稳定、离子强度适中,可有效维持电泳过程中的pH平衡、抑制核酸降解。本产品为50倍浓缩液(50×) ,使用时简单稀释即可获得高品质的1×工作液,广泛适用于DNA与RNA的琼脂糖凝胶电泳分离与鉴定,是分子生物学实验室核酸电泳的必备基础试剂。
本产品严格遵循经典TAE配方体系,每升50×浓缩液含有2M Tris-乙酸和0.05M EDTA。使用时,用蒸馏水或去离子水稀释50倍即可获得标准的1×TAE工作液,其组成为40mM Tris-乙酸、1mM EDTA,室温下pH约为8.5。
各组分在电泳体系中各司其职、协同作用:
Tris-乙酸(Tris-Acetate) :作为缓冲体系的核心,Tris提供稳定的弱碱性pH环境,乙酸提供抗衡离子,共同维持电泳过程中凝胶体系的pH稳定与离子强度。稳定的pH环境确保核酸分子在电场中保持恒定的电荷密度与迁移率,是从加样孔至凝胶底部的迁移距离高度一致、条带位置准确可重复的基础保障。
EDTA(乙二胺四乙酸) :作为金属离子螯合剂,EDTA可有效螯合体系中的二价金属离子(如Mg²⁺、Ca²⁺等)。这些离子是DNase和RNase的必需辅因子,EDTA通过封闭这些离子有效抑制核酸酶活性,防止DNA/RNA样品在电泳过程中被降解。同时,EDTA的加入也有助于防止Mg²⁺离子与核酸生成沉淀。
① 大片段DNA分离效果更优
当DNA片段超过13kb时,TAE能提供更清晰的条带分离。这是因为乙酸根离子较低的离子强度减少了核酸与凝胶的静电相互作用,降低了大规模DNA的“滞留效应”。对于基因组DNA分析、大分子超螺旋DNA分离等场景,TAE的表现尤为出色。
② 迁移率快,节省实验时间
研究表明,双链线性DNA在TAE中的电泳速度比其他缓冲液快约10%。这一特性对时间敏感的实验尤为宝贵,有助于在较短时间内完成电泳分离。
③ DNA回收效率高,适配下游实验
TAE缓冲液不含硼酸,不会与琼脂糖生成非共价结合的四羟基硼酸盐复合物干扰回收效率。因此,回收DNA片段时宜用TAE缓冲系统进行电泳。纯化后的DNA片段可直接用于酶切、连接、转化等下游实验,回收效率显著高于TBE体系。
④ 超螺旋DNA分子量更准确
超螺旋DNA在TAE中电泳时测得的相对分子质量更符合实际值。这一特性使TAE成为质粒DNA分析的首选缓冲液。
⑤ 条带清晰规整,重复性好
得益于TAE稳定的pH环境与适中的离子强度,核酸片段在电场中沿凝胶孔径按分子大小有序迁移,电泳条带通常呈现边界清晰、边缘锐利、无拖尾或弥散的理想形态。批次间稳定的配方与优异的缓冲性能,确保了不同时间、不同操作者获得的电泳图谱具有高度的可重复性。
⑥ 经济高效,可重复使用
1×TAE工作液在常规使用后可以重复使用2-3次。但如果出现缓冲疲劳(表现为条带扩散、迁移变慢)、离子强度下降(电泳时间异常延长)或污染,应立即更换新缓冲液。
| 特性 | TAE缓冲液 | TBE缓冲液 |
|---|---|---|
| 缓冲能力 | 相对较低,不适合长时间电泳 | 高,适合长时间电泳 |
| 最佳分离范围 | >1-2kb大片段DNA | <1kb小片段DNA |
| DNA回收效率 | 高,适合胶回收实验 | 低,硼酸影响回收 |
| 超螺旋DNA | 分子量更准确 | 分子量偏大 |
| 电泳速度 | 较快(约快10%) | 较慢 |
| 价格 | 较低 | 较高 |
对于分辨率要求不高时,使用TAE和TBE均可;对于大片段DNA(>1-2kb)的分离,TAE是更优选择;而对于小片段DNA(<1kb)的高分辨率分离,TBE效果更好。若实验涉及DNA片段的胶回收,则应首选TAE缓冲液。
本产品适配多种核酸电泳相关实验场景:
DNA琼脂糖凝胶电泳:用于PCR产物鉴定、质粒DNA酶切分析、基因组DNA质量检测
DNA片段胶回收:推荐使用TAE体系,回收效率高于TBE
非变性RNA琼脂糖凝胶电泳:用于总RNA或特定RNA的质量评估
凝胶制备缓冲液:可直接使用TAE缓冲液配制琼脂糖凝胶
1×工作液配制:取适量50×TAE浓缩液,使用蒸馏水或去离子水按1:50比例稀释(例如:10mL 50×TAE + 490mL 蒸馏水 = 500mL 1×工作液),充分混匀即可使用。
保存条件:本产品推荐室温储存,有效期至少12个月。若产品出现沉淀析出,属于正常物理现象,请置于37℃水浴使其溶解,不影响使用。
注意事项:如果每次的使用量很小,可以适当分装后再使用。操作时请穿实验服并佩戴一次性手套。
50×TAE电泳缓冲液以经典的科学配方、稳定的缓冲性能、快速的大片段迁移率与便捷的浓缩液形式,为核酸琼脂糖凝胶电泳提供了可靠、高效的分离体系。它让DNA与RNA的分离鉴定变得条带清晰、结果可靠、操作简便,是每一位分子生物学研究者值得信赖的基础试剂。
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