详细介绍
在基因表达分析、转录组测序及RNA功能研究中,信使RNA(mRNA)的质量直接影响下游实验结果的准确性与可靠性。然而,mRNA仅占总RNA质量的约4%,而核糖体RNA(rRNA)约占80%——如何从大量rRNA及其他干扰成分中高效富集目标mRNA,是RNA样品制备环节的核心挑战。mRNA纯化试剂盒(磁珠法) 正是针对这一需求而设计的高效解决方案。它基于磁珠表面偶联的Oligo(dT)序列与mRNA 3'端poly(A)尾之间的特异性碱基配对,实现对mRNA的高效捕获与纯化。操作快速简便、特异性强,能够有效去除rRNA、基因组DNA及其他干扰杂质,获得高纯度、高完整性的mRNA,为RT-PCR、转录组测序、cDNA文库构建等下游分子实验提供优质模板。
本试剂盒是专门用于从总RNA或细胞/组织裂解液中快速分离纯化高纯度完整mRNA的磁珠法试剂盒。试剂盒采用共价偶联Oligo(dT)₂₅的顺磁性微球作为核心捕获材料,配合优化的结合、洗涤与洗脱缓冲体系,能够稳定、高效地从总RNA或直接样本裂解液中富集带poly(A)尾的mRNA分子。
本试剂盒提供的mRNA可直接应用于RT-PCR、qPCR、高通量测序、mRNA文库构建、cDNA文库构建、Northern blot分析、RACE等分子生物学实验,还可用于mRNA疫苗研发等前沿应用领域。
本试剂盒的纯化原理基于分子杂交与磁分离技术的巧妙结合。大多数真核生物的mRNA在其3'端均具有poly(A)尾结构。试剂盒中的磁珠表面共价修饰了25聚脱氧胸苷酸序列——Oligo(dT)₂₅。当真核生物总RNA与磁珠混合孵育后,磁珠表面的Oligo(dT)序列与mRNA 3'端的poly(A)尾通过碱基互补配对实现特异性结合。随后,借助外界磁场的作用,结合了mRNA的磁珠与溶液中的其他成分(rRNA、tRNA、基因组DNA、蛋白质等)快速分离。经过充分的洗涤步骤去除杂质后,最后用低盐洗脱液将高纯度、完整的mRNA从磁珠上洗脱下来,即可获得可直接用于下游实验的优质mRNA模板。
本试剂盒的操作流程高度简化,仅需孵育、洗涤、洗脱等简单步骤,整个纯化过程通常不超过15分钟即可完成。所有操作均在同一个离心管中完成,有效降低了样品污染与损失的风险。标准操作流程如下:
磁分离与洗涤:将样品置于磁力架上,室温静置使磁珠聚集,吸除上清。加入洗涤缓冲液重悬磁珠,再次磁分离并吸除上清,重复洗涤。
洗脱:加入洗脱缓冲液或无核酸酶水重悬磁珠,于80℃加热2分钟将mRNA洗脱下来,磁分离后小心吸取上清,即获得纯化mRNA。
高纯度与高完整性:基于Oligo(dT)与poly(A)尾的特异性碱基配对,试剂盒能够高效去除总RNA中占比高达80%的rRNA及其他非poly(A) RNA。rRNA、tRNA、microRNA等非多腺苷酸化RNA分子不会与磁珠结合,在洗涤步骤中被有效去除。经纯化获得的mRNA纯度极高、完整性好,mRNA纯化效果可接近100%。
高回收率与高效富集:本试剂盒的提取体系经过反复测试和优化,能够从总RNA中分离纯化获得90%以上的mRNA。每毫克磁珠可纯化约2-3 μg mRNA。高效的回收与富集能力确保了即使在起始RNA量有限的情况下,仍能获得足量的高质量mRNA模板。
快速便捷,操作无忧:纯化全过程不超过15分钟,所有操作在同一离心管中完成。试剂盒不涉及苯酚、氯仿等有毒有机试剂,也无需乙醇或异丙醇沉淀步骤,操作安全、环保。
直接兼容下游应用:纯化得到的mRNA可直接应用于RT-PCR、qPCR、高通量测序、cDNA文库构建、Northern blot、RACE等多种下游分子生物学实验,也可用于mRNA疫苗的研发。磁珠上结合的mRNA还可直接将Oligo(dT)序列作为第一链cDNA合成的引物,实现“结合-反转录”一体化操作。此外,mRNA可在低至5 μL的体积中洗脱,无需额外沉淀步骤即可直接用于后续反应。
本试剂盒广泛适用于以下实验场景:
本试剂盒所有组分均经过严格的质量控制,确保无DNase、RNase污染。磁珠应在2-8℃条件下保存,严禁冷冻。运输可采用冰袋或常温方式。使用前应将磁珠悬液充分混匀,避免磁珠长时间处于磁场或高速离心,以防磁珠聚团。
mRNA纯化试剂盒(磁珠法)以Oligo(dT)磁珠特异性捕获为核心技术,以高纯度、高回收率、快速便捷为核心优势,为基因表达分析、转录组测序及RNA功能研究等领域提供了可靠、高效的mRNA制备解决方案。选择本试剂盒,即意味着从RNA样品制备的源头获得高质量保障,让每一次下游实验都建立在坚实的基础上。
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