DNase I 溶液

高纯度DNase I（RNase-free）：为精准分子实验提供可靠的DNA去除方案

在分子生物学与生物化学研究中，核酸样本的纯度是决定下游实验成败的关键因素之一。无论是RNA提取过程中残留的基因组DNA（gDNA），还是蛋白制备物中干扰分析的核酸杂质，都可能严重影响实验结果的准确性与可靠性。DNase I（脱氧核糖核酸酶I） 作为一种高活性、高特异性的核酸内切酶，能够精准降解单链或双链DNA，且无蛋白水解活性，是去除核酸污染、提升样本纯度的理想工具。本品为RNase-free级别的高纯度DNase I，活性稳定、操作便捷，广泛适配核酸提取、蛋白纯化等多场景前处理需求。

产品概述：精准高效的DNA“分子剪刀”

DNase I（Deoxyribonuclease I）是一种来源于牛胰腺的脱氧核糖核酸内切酶，分子量约为39 kDa。它能够以同等效率随机水解单链或双链DNA的磷酸二酯键，生成带有5'-磷酸基团和3'-羟基的寡核苷酸片段。其作用犹如一把精准的“分子剪刀”，能够高效、特异地切割DNA分子，且对RNA分子无任何降解活性。本产品经严格纯化工艺处理，确保无RNase及蛋白酶活性，可直接用于对RNA完整性要求较高的敏感实验。

作用原理：金属离子依赖的精准酶切机制

DNase I的活性发挥依赖于特定的金属离子环境。其作用过程可分为以下步骤：

1. 与底物结合：DNase I首先通过静电相互作用与DNA双螺旋结构的磷酸骨架结合。

2. 水解反应：酶分子的活性中心与DNA结合后，催化磷酸二酯键断裂，将长链DNA切割为寡核苷酸片段。

3. 金属离子激活：DNase I的活性严格依赖于钙离子（Ca²⁺） ，并可被镁离子（Mg²⁺）或锰离子（Mn²⁺）激活。Ca²⁺能够稳定酶分子的活性构象，而Mg²⁺则参与催化反应。

关键特性：

• 无蛋白水解活性：本品仅作用于DNA，不降解蛋白质，确保蛋白样本的完整性与活性。

• 对RNA无活性：RNase-free级别产品对RNA无任何降解活性，可安全用于RNA样本处理。

• 可完全灭活：通过EDTA螯合金属离子后65-75℃加热5-15分钟即可彻底灭活，无残留酶活干扰下游实验。

核心优势：高活性、高纯度、高稳定性

✅ 高活性，精准定量

本品活性定义明确：1个活性单位（U）指在37℃条件下，10分钟内完全降解1μg pBR322质粒DNA所需的酶量。这一基于质粒底物的定义方式与实际应用高度相关，便于实验者精确计算用量。

✅ RNase-free品质保障

优质DNase I产品经过严格纯化，确保不含RNase活性。质量控制标准规定，5U酶与1.6μg MS2 RNA在37℃反应4小时，RNA电泳谱带应无变化。本品RNase活性经检测降至无法检出水平，为RNA相关实验提供可靠保障。

✅ 活性稳定，耐受性好

本品在中性pH范围（7.0-8.0） 内活性稳定，可耐受多种实验条件。冻干粉形式可在4℃稳定保存12个月以上；溶液形式建议分装后于-20℃保存。部分产品可耐受多达10次反复冻融而不显著损失活性。

✅ 兼容各类纯化体系

本品可与多种细胞裂解试剂、核酸提取试剂盒及蛋白纯化体系配合使用，广泛兼容各类实验流程。

核心应用场景

一、RNA样本中去除基因组DNA污染（最经典应用）

在RNA提取过程中，残留的基因组DNA是影响下游实验准确性的主要干扰因素。在进行RT-qPCR、转录组分析、mRNA表达量分析等实验时，DNA污染会导致假阳性结果或定量偏差。在提取RNA时，可在裂解细胞后加入适量DNase I，于37℃、pH 7-8条件下孵育，DNase I将特异性降解DNA分子。经DNase I处理后的RNA样本，可直接用于RT-PCR、RT-qPCR及RNA-seq等对RNA纯度要求较高的实验。

二、体外转录后去除DNA模板

在体外转录实验中，常用T7、T3、SP6等RNA聚合酶合成RNA。合成后的RNA产物中可能残留DNA模板，这些模板若进入下游应用（如mRNA疫苗生产）可能引发免疫反应或干扰功能研究。DNase I能够高效降解残留的DNA模板，同时完整保留RNA产物，保证RNA疫苗的质量与安全性。

三、蛋白制备物中去除DNA

在蛋白提取与纯化过程中，细胞裂解物中的DNA会增加样品粘度、干扰移液操作，并可能影响下游蛋白分析。在细胞裂解试剂中加入DNase I，可有效去除蛋白制备物中的DNA杂质，改善蛋白提取效率。研究表明，在纯化早期阶段使用DNase I去除核酸杂质，可显著提升后续蛋白纯化效果。

四、分子生物学研究

本品还广泛应用于以下实验场景：

• DNase I足迹实验（Footprinting） ：用于识别与蛋白结合的DNA序列

• 缺口平移（Nick Translation） ：用于DNA探针的放射性标记

• rRNA去除：在RNA建库测序中降解DNA探针

• 细胞凋亡TUNEL检测：标记DNA断裂末端

• 避免细胞聚集：处理培养细胞时防止细胞聚集

操作指南与注意事项

标准操作流程（以RNA样本去基因组DNA为例）：

1. 体系配制：在RNase-free离心管中，按以下比例配制反应体系：

• RNA样品（1μg）：适量

• 10× DNase I反应缓冲液：1/10体积

• DNase I（1U/μL）：1-2μL（每μg RNA对应1U酶量为经验优化比例）

• RNase-free水：补足至总体积

2. 消化反应：37℃孵育15-30分钟

3. 终止反应：加入EDTA至终浓度2.5-5mM，65-75℃加热5-15分钟灭活酶活性

注意事项：

• 全程RNase-free操作：所有试剂、耗材需确保无RNase污染，RNA样本全程冰上操作

• 必须使用配套缓冲液：DNase I活性依赖于Ca²⁺等金属离子，必须使用配套的10×反应缓冲液

• EDTA先于加热加入：必须先加EDTA螯合Mg²⁺后再加热，不可颠倒顺序

• 高浓度单价离子抑制活性：Na⁺、K⁺浓度超过30mM时会显著降低DNase I活性

• 分装保存：建议首次使用时根据实验需求分装，避免反复冻融

产品规格与订购信息

• 产品名称：脱氧核糖核酸酶I / DNase I（RNase-free）

• 产品规格：200U / 1000U

• 产品形式：溶液（1U/μL）或冻干粉

• 保存条件：-20℃保存

• 运输条件：冰袋运输

• 有效期：12-24个月（视具体形式与储存条件而定）

高纯度DNase I（RNase-free）以精准的DNA酶切能力、严格的RNase-free品质保障、稳定可靠的酶活性能，为RNA样本纯化、蛋白制备及分子生物学研究提供了高效、可靠的DNA去除解决方案。选择本品，即意味着从样本前处理的源头获得坚实保障，让每一个下游实验数据都更加精准、可靠。

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